背景介紹
CAR-T細(xì)胞治療是當(dāng)今醫(yī)學(xué)研究最前沿、最熱門的腫瘤療法之一,已經(jīng)在多發(fā)性骨髓瘤、白血病、淋巴瘤和神經(jīng)母細(xì)胞瘤等多種癌癥治療的臨床試驗中取得了巨大的成功。CAR-T生產(chǎn)制備流程主要包括:T細(xì)胞富集、分化、擴(kuò)增,通過病毒或非病毒載體進(jìn)行CAR基因的表達(dá),然后再進(jìn)行體外CAR-T細(xì)胞擴(kuò)增,最終制成細(xì)胞產(chǎn)品。因此能將特定CAR基因?qū)隩細(xì)胞的病毒載體是整個CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品中的關(guān)鍵部分之一。目前最常用于CAR-T細(xì)胞的制備的載體是慢病毒載體,慢病毒載體的質(zhì)量對細(xì)胞產(chǎn)品及其治療效果具有直接影響。
慢病毒(Lentivirus)載體是在HIV-1(人類免疫缺陷I型病毒)基礎(chǔ)上發(fā)展的基因治療載體,對分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞均有感染能力,可以將外源基因穩(wěn)定、有效整合到宿主染色體,并且持久表達(dá),產(chǎn)生的免疫反應(yīng)小。
慢病毒滴度檢測方法
衣殼蛋白(p24)是HIV病毒顆粒的主要結(jié)構(gòu)蛋白,在病毒的包裝和成熟過程中起到關(guān)鍵作用,氨基酸序列在HIV中高度保守,缺失p24會導(dǎo)致病毒無法成功正常組裝,在質(zhì)量檢測中,檢測p24蛋白含量即可換算得到慢病毒的顆粒數(shù)。
圖1. HIV病毒顆粒示意圖(圖片來源于網(wǎng)絡(luò))
慢病毒滴度計算公式
一個慢病毒顆粒(Lentiviral Particle, LP)中約有2000個p24蛋白分子,則一個LP約等于2000×24×103/(6×1023)g即8×10-5 pg的p24,那每ng的p24有1.25×107 LPs, 按照每100-1000LPs中有1個感染活性的病毒載體(TU)可計算出每ng的p24約1.25 ×104-5 TU。
相關(guān)法規(guī)要求
Acnovia Lentivirus Titer ELISA Kit