[上新嘍!]腺相關(guān)病毒特異性抗體

2023-02-08 新品速遞

腺相關(guān)病毒（AAV）屬于細(xì)小病毒科，是一種安全性高、免疫原性低、宿主范圍廣、表達(dá)穩(wěn)定和性質(zhì)穩(wěn)定的非致病性ssDNA病毒屬小型無(wú)包膜病毒,被廣泛用作基因治療的載體。Acnovia目前提供AAV2、6、9血清型的腺相關(guān)病毒（AAV）和AAV（VP1）抗體，可特異性識(shí)別完整的病毒衣殼以及AAV病毒亞基和復(fù)制品的特異性抗體,還將提供用于相關(guān) AAV 亞型的滴定 ELISA 試劑盒。
AAV 基因組結(jié)構(gòu)、DNA 復(fù)制和病毒組裝
第一個(gè)人類腺相關(guān)病毒（AAV）于1965年被發(fā)現(xiàn)，是腺病毒（Ad）制劑的污染物。AAV 是最小的病毒之一，其非包膜二十面體衣殼約為 22 nm。盡管AAV在人群中的血清陽(yáng)性率很高（大約80%的人類為AAV2血清陽(yáng)性），但該病毒與任何人類疾病無(wú)關(guān)。AAV具有約4.7千堿基（kb）的線性單鏈DNA（ssDNA）基因組，在末端有兩個(gè)145個(gè)核苷酸長(zhǎng)的倒置末端重復(fù)序列（ITR）。該病毒不編碼聚合酶，因此依賴于細(xì)胞聚合酶進(jìn)行基因組復(fù)制。ITRs位于兩個(gè)病毒基因的兩側(cè) - rep（復(fù)制）和“cap（衣殼），分別編碼非結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)蛋白^（1）。

圖1.AAV基因組和蛋白結(jié)構(gòu)

Cap基因通過(guò)交替剪接和翻譯起始產(chǎn)生三種衣殼蛋白VP1（病毒粒子蛋白1）、VP2和VP3，分子量分別為87、72和62 kDa，這些衣殼蛋白組裝成60個(gè)亞基的近球形蛋白質(zhì)殼。通過(guò)使用兩個(gè)啟動(dòng)子和選擇性剪接，rep基因編碼四種調(diào)節(jié)蛋白，分別稱為Rep78，Rep68，Rep52和Rep40，這些蛋白質(zhì)參與AAV基因組復(fù)制。

腺相關(guān)病毒AAV載體的應(yīng)用

從歷史上看，大多數(shù)重組AAV（rAAV）載體都是基于構(gòu)成該屬原型的血清型2（AAV2）。已經(jīng)采取了許多方法來(lái)改善AAV載體的產(chǎn)生，但目前使用最廣泛的兩種原則不同的策略，具體取決于如何提供腺病毒輔助因子。一種方法依賴于野生型腺病毒感染到穩(wěn)定攜帶AAV代表/帽基因的細(xì)胞系以及AAV載體DNA中；另一種方法是無(wú)輔助方法，基于對(duì)宿主細(xì)胞（如HEK293細(xì)胞）中AAV產(chǎn)生所需的所有元件進(jìn)行無(wú)腺病毒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染^（2）。

它涉及AAV生產(chǎn)細(xì)胞與3個(gè)質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染：

（1）攜帶目的基因的含AAV ITR的質(zhì)粒;

（2）攜帶AAV Rep-Cap的質(zhì)粒;

（3）提供從腺病毒分離的輔助基因的質(zhì)粒。

圖2.AAV載體組裝流程

重組腺相關(guān)病毒（rAAV）載體被大量用于體內(nèi)基因轉(zhuǎn)移，是靶向遺傳性疾病、遺傳性疾病和許多其他疾病的有前途的治療方法。動(dòng)物模型和正在進(jìn)行的臨床試驗(yàn)的結(jié)果表明，具有不同血清型的AAV載體對(duì)許多不同的組織具有巨大的潛力，包括視網(wǎng)膜，中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS），一些內(nèi)臟或骨骼肌。為了將這些發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化為臨床應(yīng)用，還需要解決一些問(wèn)題。

一個(gè)主要的挑戰(zhàn)是AAV衍生基因療法的潛在免疫毒性，其形式是針對(duì)AAV衣殼抗原的有害免疫反應(yīng)，這可能會(huì)抑制治療效果。不需要的免疫反應(yīng)被認(rèn)為主要受到缺乏目的轉(zhuǎn)基因的空AAV衣殼的影響。因此，準(zhǔn)確表征幾種感染性定義測(cè)量值（如AAV基因組滴度，感染滴度或總AAV衣殼滴度）對(duì)于提高和確保AAV衍生基因療法的有效性和安全性是必不可少的。
腺相關(guān)病毒AAV特異性抗體的應(yīng)用

Acnovia使用不同血清型（AAV2、6、9）的AAV完整病毒顆粒和部分衣殼蛋白（VP1）作為抗原進(jìn)行免疫反應(yīng)，通過(guò)噬菌體展示等淘選方法獲得相應(yīng)的單克隆抗體序列后進(jìn)行重組表達(dá)，我們獲得了有親和力的重組抗體蛋白，可用于Dotblot半定量檢測(cè)AAV衣殼滴度。

除了AAV抗體產(chǎn)品，ELISA一直是檢測(cè)抗體滴度的經(jīng)典和可靠方法。Acnovia將在AAV特異性抗體的基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)配套的腺相關(guān)病毒（AAV）ELISA滴度檢測(cè)試劑盒^（3）。該ELISA試劑盒的捕獲抗體，可識(shí)別野生型、重組型或者組裝的空AAV衣殼，而不會(huì)識(shí)別未組裝的AAV蛋白，因此結(jié)果準(zhǔn)確，可重復(fù)性高。尤其適合用于rAAV特征鑒定和制備方法優(yōu)化。

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